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时间：2008-1-26 9:20:39 文章：秘鲁旅游 访问次数： 【关闭】

    人参和西洋参为五加科植物的根,是常用名贵中药材。目前药品及保健品市场又引入秘鲁产人参保健产品,它们都具有良好的滋补保健作用,但性质有异。因此如何对其进行严格准确的质量控制是一个有意义的研究课题,本文以文献提出的四溶剂紫外指纹图谱方法为基础,研究了该产品四维紫外指纹图谱。借鉴人参、西洋参指纹图谱研究工作,研究了它们的无水乙醇提取物的HPLC指纹图谱,与人参和西洋参对照品的对应图谱比较,发现三者的四维紫外指纹图谱非常相近,仅有细微的差别。三者的无水乙醇提取物的HPLC指纹图谱也很相似,但秘鲁产人参保健品与人参更接近。本文引入了两种新的衡量任意两种药材相似性和差异的指标,共有峰率和变异率,结果表明,该指标可以较好地衡量两种药材间的异同。

    1　材料

    1.1　仪器　

    UV760CRT紫外分光光度仪(上海分析仪器厂),日本岛津LC-10A高效液相色谱仪,SPD-10A检测器,浙江大学N2000双通道色谱工作站,十万分之一精密电子天平,KQ-250E超声清洗仪。

    1.2　药品及试剂

    秘鲁产人参保健品(山东中医药大学王新陆教授提供,商品名Fresh Maca Powder,Batch 9121779/MA);人参对照品药材(批号917-9905 Radix Ginseng)、西洋参对照品药材(批号09717-200005 Panacis quinquefoli)(购自中国药品生物制品鉴定所);三七(云南产Radix notoginseng,购自济南建联药店);无水乙醇(A·R),环己烷(A·R),氯仿(A·R),二次蒸馏水;色谱纯甲醇、色谱纯乙腈(天四友公司),三次水,磷酸二氢钾(A·R)。

    2　实验条件

    2.1　测试样品制备条件

    样品加入各种提取溶剂,各在室温下采用超声方法提取1h(水作溶剂0.5h),可达到最大且稳定的提取率。

    2.2　紫外测试条件

    测定波长190~400nm,狭缝1.0nm,采样间隔0.5nm。

    2.3　HPLC分析条件

    采用Irregular-H C18ODS(250mm×4.6 mm id 10μm)色谱柱,用乙腈-0.050mol·L-1磷酸二氢钾(50∶50)为流动相,流速1.0mL·min-1,柱温精密控制在35°C,紫外检测器波长203nm每次进样20μL。

    3　样品制备

    3.1　紫外指纹图谱测试液制备

    将药材粉末过60目筛,精密称取0.2500g在70°C烘干2h的秘鲁产人参保健品粉末(人参和西洋参对照品同),置于具塞50mL锥形瓶中,精密加入20.00 mL环己烷,超声提取1h,过滤,用环己烷洗涤,收集洗涤液,定容至25.00mL,作为待测液,挥干样品所带环己烷,加入20.00mL氯仿,超声提取1h,过滤、洗涤得25.00mL氯仿提取液,无水乙醇、水提取液方法同。人参及西洋参对照品测试液制备方法同上(平行两份)。环己烷、氯仿测定原液,无水乙醇提取液稀释1~2倍,水提取液稀释10~20倍(使吸光度在1~2A),以对应的溶剂为参比溶液进行紫外指纹图谱测定。

    3.2　HPLC指纹图谱测试液制备

    精密称取0.2500g在70°C烘干2h的秘鲁产人参保健品粉末(平行5份)、人参、西洋参、三七(各平行3份),每份样品先用25.00mL氯仿提取1h,提取液弃之,挥干氯仿,加入20.00mL无水乙醇,超声提取1h,过滤洗涤得25.00mL提取液,将其置于蒸发皿中于沸水浴挥干溶剂,用色谱甲醇分多次溶解、转移、定容至一定体积(秘鲁产人参产品10mL,人参、西洋参、三七5mL),溶液过0.45μm微孔滤膜,测定指纹图谱。

    4　实验结果分析

    4.1　紫外指纹图谱分析

    4.1.1　秘鲁产人参保健品、人参及西洋参水提取液紫外指纹图谱分析

    从紫外指纹图谱形状看,三者在250~290nm间都有一个平缓的阶梯式的吸收平台曲线,在(195±2)nm,三者都有一个形状相近的强吸收峰,在吸收峰处都有两个小的吸收峰,这说明3种样品的水溶性提取物含有相似的成分群.在样品等量情况下,该保键品水提取液的吸光度是人参和西洋参的2倍。

    4.1.2　秘鲁产人参保健品、人参及西洋参无水乙醇提取液紫外指纹图谱分析

    三者在250~290nm间,都有一个平缓的阶梯式的吸收平台曲线,在208~213nm间都有一个大的吸收峰。在样品等量情况下,秘鲁产人参保健品提取液的吸光度是人参及西洋参之吸光度的近3倍,说明该产品含有较高含量的该成分群,同时由于该成分群含量高,造成最大吸收峰波长紫移3nm,另外,人参无水乙醇提取液在208.50nm,西洋参提取液在209.50nm各有一个小的吸收峰,而该产品提取液此峰不明显。

    4.1.3　秘鲁产人参保健品、人参及西洋参氯仿提取液紫外指纹图谱分析

    三者在250~270nm间都有一个形状近似的吸收峰,说明三者含有相似的成分群。但西洋参与人参的指纹图更为接近,说明二者之间含有的成分群具有更大的相似性。秘鲁产人参保健品氯仿提取液在240~270nm间有4个小的吸收峰而与人参及西洋参稍有不同。说明该产品与人参及西洋参氯仿提取物中的成分可能有差异。

    4.1.4　秘鲁产人参保健品、人参及西洋参环己烷提取液紫外指纹图谱分析

    在220~230nm,265~270nm区间,三者的图谱十分相近,说明三者环己烷提取液中含有十分近似的成分群。从吸光度看三者的该类成分群含量相近。

    4.1.5　结论

    由上述4种溶剂提取液紫外指纹图谱分析可知,3种样品所含成分群十分相近,但有一定的差别。秘鲁产人参保健品的水、无水乙醇提取物具有相对高的含量,而人参与西洋参的含量相近。三者的氯仿、环己烷提取物含量相近。在成分组成上,秘鲁产人参保健品氯仿提取物较人参、西洋参有区别。

    4.2　HPLC指纹图谱分析

    秘鲁产人参保健品、人参、西洋参及三七HPLC指纹图谱见图1~4。

    　　秘鲁产人参保健品、人参、西洋参及三七4种样品HPLC指纹图谱数据-相对保留时间和相对峰面积。

    4.2.1　指纹图谱共有峰率和变异率分析

    文献中以重叠率为指纹图谱分析指标,考虑到在计算公式分母中,两个色谱指纹图中的色谱峰不都是等价的,可分为两类,一类是共有峰,即两个色谱图中都出现的峰,另一类只在各自的色谱图中出现,这样计算的重叠率较难准确地反映两个色谱峰的真实相似程度。因此,探索新的鉴别指标是指纹图谱研究的目标之一。本文对重叠率的计算方法作了改进,定义了两个新的鉴别指标,利用双指标对指纹图谱进行鉴别。

    共性鉴别指标—共有峰率P:色谱指纹图谱中的的共有峰数与两个色谱图的独立峰数的比值。

    共有峰率P=(共有峰数Ng/两个色谱图中的独立峰数Nd)·100%

    共有峰数Ng:指在比较的两个色谱图中都出现的色谱峰的个数,即含有的相同成分数